PCR反应体系主要是什么？

2023-10-23 你知道PCR反应体系主要包含那些吗？让我们一起来看看吧！一、模板（template)模板即扩增用的DNA，可以是任何来源DNA(如基因组DNA、质粒DNA等)或RNA（如总RNA、mRNA、tRNA、rRNA、病毒RNA等），但必须符合两个条件：一是纯度必须较高，二是浓度不能太高以免抑制。模板是待扩增的目的基因或特异片段，如诊断病人是否携带有突变基因时，其模板就是提取的病人血液中的DNA或RNA片段。PCR对模板DNA的纯度不要求很高，但应尽量不含有对PCR反应有抑制作用的杂...

PCR技术的基本原理、各步骤的目的是什么？

2023-10-23 你知道PCR技术的基本原理、各步骤的目的是什么吗？让我们一起来看看吧！一、PCR技术基本原理PCR是一种选择性体外快速扩增DNA片段的方法。在体外以类似于细胞内DNA的半保留复制过程，以拟扩增的模板DNA分子，与模板DNA互补的寡核苷酸引物、DNA聚合酶、4种dNTP及适合的缓冲体系组成的反应体系，经过重复地变性一退火一延伸三步，扩增新的目的DNA链，这个过程通过控制反应体系的温度来实现。PCR包含下列三步反应：1、变性(denaturation)将反应体系混合物经加热至94...

如何选择免疫组化中的一抗？

2023-10-20 免疫组化实验看似容易，但真想把结果做漂亮，还是需要花上很长一段时间去积累和摸索经验。一味按照网上操作流程来做，结果往往并不理想，最终结果未能达到预期的效果。那么如何选择免疫组化实验中的一抗呢？让我们一起来看看吧！一、单克隆和多克隆抗体的选择存在于抗原表面的，决定抗原特异性的特殊化学基团称为抗原决定簇，又称抗原表位。一个抗原可以有一种或多种不同的抗原表位，每种表位只有一种抗原特异性。用一种包含多种抗原决定簇的抗原免疫动物，可刺激机体多个B细胞克隆产生针对多种抗原表位的抗体，就是...

细胞胞内染色操作流程是什么？

2023-10-20 你知道细胞胞内染色操作流程是什么吗？让我们一起来看看吧！一、细胞计数将培养好的细胞收集于15mL离心管并计数；500g离心4min，去上清。二、制备单细胞悬液将收集的细胞用1mL0.5%BSA/PBS溶液重悬，400g离心3min，去上清，重复2次；用0.5%BSA/PBS溶液重悬细胞至浓度1x106个细胞/mL，分配到96孔板中，每孔100μl细胞悬液，400g离心5min去上清。三、固定每孔加入100μl细胞固定剂重悬细胞，2-8°孵育20min。四、洗涤400g离心5m...

免疫细胞（ICC）实验步骤有哪些？

2023-10-19 免疫细胞化学(ICC)是一种使用荧光抗体或染料来检测细胞内靶抗原的技术。那么你知道免疫细胞（ICC）实验步骤有哪些吗？让我们一起来看看吧！一、细胞培养/固定很多抗原在离体组织中只存在很短时间，自溶（autolysis）和坏死（necrosis）使得抗原进一步降解，组织形态和结构被破坏。样品浸泡在合适的固定液中，固定液完quan渗透组织，使蛋白失去活性，并且使组织被保存、稳定在接近invivo状态。二、通透处理通透即为对细胞膜进行打孔处理，使抗体能进入到细胞中和抗原发生结合。通...

免疫组化实验常见问题有哪些？

2023-10-19 免疫组织化学(immunohistochemistry，IHC)是一种综合定性、定位和定量；形态、机能和代谢密切结合为一体的研究和检测技术。在原位检测出病原的同时，还能观察到组织病变与该病原的关系，确认受染细胞类型，从而有助于了解疾病的发病机理和病理过程。那么你知道免疫组化实验常见问题有哪些吗？让我们一起来看看吧！一、石蜡切片再染色过程出现脱片现象1.烤片时间不够，或温度不够，可以延长烤片时间和提高烤片温度；2.用含有多聚赖氨酸的玻片，可以购买到或这自己做；3.有些组织本身就...

二代测序（NGS）的原理

2023-10-18 DNA测序技术一直是分子生物学相关研究中常用的技术手段之一，从一定程度上推动了该领域的快速发展。每一代测序技术的更替都标志着生物学中基因芯片、数据分析、表面化学、生物工程等技术领域有了新的突破，使测序向着高通量、低成本、高安全性和商业化的方向发展。那么二代测序(NGS)的原理是什么？让我们一起来看看吧！第二代测序(NGS)又称为高通量测序(High-throughputsequencing)，是基于PCR和基因芯片发展而来的DNA测序技术。二代测序引入了可逆终止末端，从而实现...

支原体污染的检测方法有哪些？

2023-10-18 支原体污染一般在显微镜下不可见，很难察觉，但细胞会受到极大的损伤，主要通过以下途径影响细胞生长及功能。那么支原体污染的检测方法有哪些呢？让我们一起来看看吧！一、分离培养法检测方法：将待检样品接种到适合支原体生长的液体培养基或固体培养基中，如有支原体污染，液体培养基颜色会改变，固体培养基将会有菌落生长。优点：该方法被称为支原体培养法的金标准，可以检测绝大多数支原体。缺点：支原体生长到一定数量才能判断是否有污染，检测时间长，无法实现对支原体的快速检测二、原位染色法检测方法：通过染...