免疫共沉淀实验操作有哪些？

2023-11-02 免疫共沉淀（CO-IP）是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。那么你知道免疫共沉淀实验操作有哪些吗？让我们一起来看看吧！一、蛋白样品制备裂解提取出免疫沉淀需要的蛋白样品，以下为HEK293T细胞样品的处理方法，其余的样品制备方法参阅相关文献。单层贴壁细胞总蛋白的提取：1.收集细胞：10cm细胞培养板上，每板细胞加1ml，4℃预冷的PBS（0.01MpH7.2～7.3）。反复冲洗把所有挂壁细胞洗下来转移到1.5ml离心管内离心：3400rpm2...

研究蛋白质相互作用的方法有哪些？

2023-11-02 相当多的蛋白质行使功能的时候并不是单打独斗的，蛋白质们通过蛋白质相互作用形成复合体然后进行工作。因此，研究蛋白质的相互作用成为研究蛋白质功能和作用机制的最为重要的环节之一。那么你知道研究蛋白质相互作用的方法有哪些吗？让我们一起来看看吧！一、酵母双杂交系统原理：很多真核生物的位点特异转录激活因子通常具有两个可分割开的结构域，即DNA特异结合域（DNA-bindingdomain,BD）与转录激活域（Transcriptionalactivationdomain,AD）。这两个结...

ELISA实验的操作要点有什么？

2023-11-01 优质的试剂，良好的仪器和正确的操作是保证ELISA检测结果准确可靠的必要条件。ELISA的操作因固相载体的形成不同而有所差异，那么你知道ELISA实验的操作要点有什么吗？让我们一起来看看吧！一、标本的采取和保存可用作ELISA测定的标本十分广泛，体液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、粪便)等均可作标本以测定其中某种抗体或抗原成份。有些标本可直接进行测定(如血清、尿液)，有些则需经预处理(如粪便和某些分泌物)。大部分ELISA检测均以血清为标本。血浆中除尚含有纤维蛋白...

RNA提取准备工作及注意事项有什么？

2023-11-01 你知道RNA提取准备工作及注意事项都有什么吗？让我们一起来看看吧！一、枪头和EP管等的消毒灭菌1.用去离子水配制0.1%（千分之一）的DEPC（剧毒物），须在通风橱中小心使用，避光密闭4℃保存;DEPC水是用DEPC处理过并经高温高压消毒的纯水。经检测不含RNase、DNase和proteinase。2.将枪头和EP管放入0.1%的DEPC内，保证枪头和EP管内都充满0.1%的DEP。3.避光、静置、过夜（12-24h）4.装枪头和EP管的盒子不需要用DEPC浸泡，将枪头或者...

如何配置培养基？

2023-10-31 你知道该如何配置培养基吗？让我们一起来看看吧！一、细胞实验全程注意事项1.无菌操作是重中之重，细胞培养对无菌条件比较苛刻，实验人在进行整个细胞实验的无菌意识一定要强，否则一个不小心，发生细菌污染，轻则浪费细胞，重则污染整个培养箱。2.实验人员进入细胞房前应该换上干净的鞋子、白大褂、手套和口罩。3.所有耗材放入工作台前都需用75%酒精进行消毒，双手进入工作台前也需要用75%的酒精进行消毒。4.进行实验前应先对工作台进行紫外灭菌30min以上，并将所有需要用到的耗材放到工作台上一...

如何选择合适的培养基？

2023-10-31 培养细胞的重要环节有很多，其中很重要的一步就是为细胞选择适合的生长环境，为其选择成分适合又营养丰富的细胞培养基。细胞培养基是供给细胞营养、维持细胞生长和增殖的多种营养物质的混合物，种类一般包括经典/基础培养基、无血清培养基以及化学成分确定的培养基等。那么该如何选择合适的培养基呢？让我们一起来看看吧！1.RPMI-1640培养基RPMI-1640广泛应用于哺乳动物、特殊造血细胞、正常或恶性增生的白细胞，杂交瘤细胞的培养，是目前应用十分广泛的培养基。主要用于悬浮细胞培养。其它像K...

影响WB实验的因素有什么？

2023-10-30 WB实验是分子生物学中最为常见的实验，那么你知道影响WB实验的因素有什么吗？让我们一起来看看吧！一、蛋白样本制备1.蛋白质的样品制备注意以下问题：（1）在合适的条件下，保持蛋白质的最大溶解性和可重复性。（2）选择合适的表面活性剂和还原剂，使其形成各自多肽的溶液。（3）尽量去除核酸，多糖，脂类等分子的干扰，裂解完毕离心之后取中层澄清溶液时避免吸到底层沉淀和上层脂类。（4）整个制作蛋白样本的制备过程必须在低温下进行，避免细胞破碎释放出各种酶类，但是注意不要反复冻融。（5）所抽取样...

DMEM和1640培养基有哪些不同？

2023-10-30 培养基有很多不同的名字是因为根据不同细胞的培养和应用场景，培养基可以分为多种类型，最常见的是DMEM、RPMI-1640、MEM等。这些培养基有自己的配方特点和适用范围。那么你知道DMEM和1640培养基有哪些不同吗？让我们一起来看看吧！DMEM(Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium)是一种zui广泛应用的细胞培养基之一，它是由Eagle于1959年开发出来的，后由Dulbecco进行了改良。DMEM主要适用于肝脏、肾脏、肺、心脏等多种类型的哺乳动物...