IHC未染色或无信号原因分析

2024-11-21 IHC未染色或无信号的原因：一、‌抗体问题‌：抗体与一抗或二抗不兼容、抗体浓度不合适、抗体失效或储存不当等都会导致无染色。例如，使用抗一抗种属来源的二抗，确认二抗是否识别一抗的亚型；使用更高浓度的抗体或延长孵育时间；设置阳性对照，确保抗体仍然有效‌。二、‌抗原修复不足‌：固定步骤可能会改变抗体识别的抗原表位，导致抗原修复不足。使用微波或压力锅进行抗原修复，确保使用新鲜配置的修复液‌。三、‌样本处理不当‌：样本存放时间过长、切片制备不当（如脱蜡不ce底）、组织切片干片等都会影响...

蛋白芯片是什么？

2024-11-21 一、蛋白芯片简介‌蛋白芯片‌是一种高通量的蛋白质功能分析检测技术，主要用于监测蛋白质之间的相互作用。其基本原理是将各种蛋白质有序地固定于载体上，然后利用标记了特定荧光物质的抗体与芯片上的蛋白质结合，通过荧光强度分析蛋白质的表达数量和相互作用关系‌。二、蛋白芯片的工作原理蛋白芯片通过将已知的蛋白质分子固定在固相载体上，然后捕获与之特异性结合的待测蛋白质。这些待测蛋白质可能存在于血清、血浆、尿液等生物样本中。通过洗涤和纯化步骤后，利用荧光扫描仪或激光共聚扫描技术测定各点的荧光强度...

如何提取细胞核蛋白？

2024-11-20 本文介绍一下用匀浆器研磨法提取贴壁细胞核蛋白的具体操作。一、前期准备1、台盼蓝染液：取台盼蓝粉剂，将其溶解在10mL的双蒸水当中配制成质量体积比为4%（4%w/v）的台盼蓝母液。在使用时，利用PBS缓冲液将母液稀释10倍，使其浓度达到0.4%，之后再与细胞悬液混合均匀。2、BufferA：包含10mmol/L的HEPES（在4℃下pH值为7.9）、1.5mmol/L的氯化镁、10mmol/L的KCL、0.5mmol/L的二硫苏糖醇（DTT）。若担心浆蛋白降解会对核蛋白产生影响...

细胞凋亡的检测

2024-11-19 一、光学显微镜观察凋亡细胞的主要特征为核染色质致密深染，形成致密质块，有时可碎裂。检测方法：细胞涂片或组织石蜡切片作HE染色或Giemsa染色，在高倍物镜下观察凋亡细胞的形态改变，结合显微测量工具可作凋亡细胞计数。二、视频时差显微技术细胞培养中常用，通过相差显微镜可动态观察细胞凋亡的变化过程，尤其是观察细胞表和外形的变化。检测方法：收集2×10^5细胞/ml培养的细胞，置于多孔培养板，加入凋亡诱导剂，在带有自动摄像装置的相差显微镜下观察凋亡细胞的动态改变，每隔1分钟作序列摄影...

PCR扩增反应中的嵌合体是什么？

2024-11-18 PCR实验中产生的嵌合体你知道是什么呢？它怎么产生的呢？那又如何预防和处理呢？这篇文章让我们一起了解一下吧！一、PCR嵌合体是什么PCR嵌合体(ChimericProducts)：PCR扩增反应中的嵌合体是指一个PCR产物来自两个或多个模板分子，通常是由于延伸未完quan导致的‌。这种现象通常发生在PCR反应中，特别是当使用多重PCR或复杂模板时。嵌合体会导致扩增产物中含有非预期的片段，有可能会影响实验结果的准确性，甚至导致错误的解释。二、形成原理在PCR反应中，DNA模板在...

流式细胞仪怎么分选T细胞?

2024-11-18 上文介绍了流式细胞术的原理及应用，今天让我们学习一下怎么用流式细胞仪分选T细胞吧~一、样本制备1.取样:取100μL抗凝血。2.标记：根据抗体说明书标记实验管。混匀后，室温避光孵育15分钟。3.溶血：将10×裂红液用水稀释10倍，每管加入1mL，振荡器混匀后室温避光静置10分钟，300g，4°C离心5分钟。4.洗涤：弃去上清，加入1mL1×PBS洗液，300g离心洗涤5分钟，洗2-3次。5.上机检测：弃去上清后加入500μL1×PBS，混匀悬浮后过滤，避光等待上机检测。二、仪...

流式细胞术原理及应用

2024-11-15 流式细胞仪在手，却不知道原理？快来看看这篇文章吧！一、流式细胞术实验原理流式细胞术（FlowCytometry,FCM）是一种单细胞定量分析技术，该技术通过测定库尔特电阻、荧光、光散射和光吸收等参数，可以定量分析细胞的结构特征（如DNA含量、蛋白、细胞膜、胞浆或胞核抗原表达量）和功能特征（如细胞内酶活性、钙流变化等）等多种重要参数，进行细胞特征分析与分选。它的核心功能是将混合物中的不同细胞分离并计数，将感兴趣的细胞分选出来，提供分类比例并进行进一步分析。二、流式细胞技术应用1...

引物探针的使用方法有哪些？

2024-11-14 一、引物探针的使用步骤‌引物探针使用步骤一：‌设计引物和探针‌：首先需要根据目标DNA序列设计特异性引物和探针。引物的长度一般为20-25个核苷酸，探针的长度一般为15-25个核苷酸。设计时要注意避免非特异性扩增，确保引物的特异性和探针的Tm值比引物Tm值高8-10°C‌。引物探针使用步骤二：‌提取模板DNA‌：从待测样本中提取DNA，作为PCR反应的模板。确保模板DNA的质量和浓度，以获得可靠的实验结果‌。引物探针使用步骤三：‌配制PCR反应体系‌：根据实验需求，配制含有引...