PBS缓冲液的配制

2025-02-12 缓冲液是一种能够抵抗溶液中因添加少量酸或碱而引起的pH变化的液体。通常由弱酸及其盐或弱碱及其盐配制而成。许多生物化学反应需要在稳定的pH环境下进行，比如血液就是一个重要的缓冲体系。今天我们来一起学习一下PBS缓冲液吧~一、PBS缓冲液优点PBS的缓冲pH值范围非常广,可配置各种pH值的酸、碱、中性缓冲液,是最常见的缓冲体系之一。配制酸性磷酸缓冲液可直接用NaH2PO4,或KHPO,pH范围在1-5;碱性缓冲液可直接用NaH2PO4,或K2HPO4,,pH范围在9-12;中性缓...

为什么同一抗体，跑出来不同分子量

2025-02-08 在生物学实验中，同一抗体在不同条件下进行电泳等分析时，跑出来的分子量却不一样，常常会出现这样的事情。有以下几个方面因素：一、抗体本身的结构特点抗体是具有4条多肽链的对称结构，包含2条较长、相对分子量较大的相同重链（H链）和2条较短、相对分子量较小的相同轻链（L链），链间由二硫键和非共价键联结形成一个由4条多肽链构成的单体分子。抗体存在多种形式，除了常见的单体形式，还可以形成多聚体。比如，IgM抗体在体内通常以五聚体形式存在，而在某些实验条件下，其聚合状态可能发生改变，从五聚体...

基因调控网络：解码生命的交响乐

2025-02-08 摘要：基因调控网络（GRNs）是控制基因表达的复杂系统，决定了细胞的身份、功能和命运。理解GRNs对于揭示发育、疾病和进化的奥秘至关重要。本文将深入探讨GRNs的组成、动态特性、分析方法及其在生物学中的应用。关键词：基因调控网络，基因表达，转录因子，顺式调控元件，系统生物学1.引言生命体由数以万计的基因组成，但并非所有基因在所有时间都处于活跃状态。基因调控网络（GRNs）就像指挥家，精确地控制着基因的表达时间和水平，从而协调细胞的活动，构建出复杂的生命体。2.GRNs的组成G...

为何酶不能保存在-80°C冰箱？

2025-02-07 生物实验室的宝子们，平时做PCR实验，一定离不开各种酶的使用，而酶一般都保存在-20°C的冰箱中。实验室除了-20℃冰箱，肯定都还有-80℃的冰箱，那为什么我们要选择-20℃，而不选择温度更低的-80°C的呢?大家有思考过这个问题吗?酶在-80°C下保存是为了维持其活性和稳定性，但并非所有酶都需要如此低温保存。以下是专业解读：1.酶的特性温度敏感性：酶是蛋白质，高温易导致变性，低温则能减缓降解和变性速度。长期保存需求：-80°C能有效抑制酶活性中心的破坏和蛋白水解酶的降解。2...

悬浮细胞的转染

2025-02-06 一、悬浮细胞都有什么？悬浮生长的细胞是指在体外培养时不依赖于支持物表面，而是在培养液中以悬浮状态生长的细胞。这类细胞通常来源于血液、淋巴组织，例如某些肿瘤细胞和转化细胞。悬浮细胞的特点是细胞呈圆形，一般不贴于支持物上，易于大量繁殖。在体外培养的细胞类型中，悬浮细胞可以呈单个细胞或细小的细胞团生长。以下是一些常见的悬浮生长细胞类型：小鼠腹水瘤S180小鼠骨髓瘤NS1和SP2/0人造血系肿瘤细胞U937、HL60、K562人原髓细胞白血病细胞HL-60小鼠白血病细胞WEHI-3人...

慢病毒转染贴壁细胞全流程详解

2025-02-06 慢病毒转染贴壁细胞全流程详解一、细胞种板将细胞种在12孔板中，每孔1.5×10^5个细胞。每孔加入1mlwan全培养基。二、病毒感染1.待细胞生长至30%～50%时开始转染。2.将病毒从冰箱取出，放在冰上融化。3.打开生物安全柜，关闭风机，戴好帽子和口罩。4.弃去培养基，用PBS洗三次。5.每孔加入500ulwan全培养基。6.根据公式计算每孔所需病毒量：每孔病毒量（μL）=MOIx细胞数/病毒滴度（TU/mL）×1000。7.4小时后，再向孔板中加入500ulwan全培养基...

小分子蛋白的WB该如何？

2025-01-23 WB（WesternBlot）是一种常用的生物化学实验技术，用于检测和分析蛋白样品中特定蛋白质的存在和表达水平。它通过将样品中的蛋白质分离并转移到膜上，然后使用特定的抗体识别目标蛋白，并通过化学或免疫检测方法来可视化这些蛋白质。WesternBlot技术通常包括样品制备、SDS-PAGE电泳分离、蛋白转印、封闭和抗体检测、曝光显影等步骤。目前WB被广泛应用于生物医学研究中，用于研究蛋白质表达、翻译后修饰以及蛋白质相互作用等。图1.WB流程图在日常实验过程中，小分子蛋白是非常常...

明明冻存的时候细胞长得好好的，怎么一复苏就完啦？

2025-01-21 不知道大家是否会遇到细胞冻存的时候状态非常不错，结果等到需要用到该细胞的时候怎么也复苏不起来的情况啊？或许可能是冻存细胞的时候出现了什么差错？一.细胞冻存的原则：慢冻，细胞在冷冻过程中，如果降温过快，会形成大的冰晶，这些冰晶会破坏细胞结构，导致细胞死亡。详细版本见《细胞冻存的原理是什么？》二.冻存液的配置：常用配置比例：培养基:血清:DMSO=7:2:1适用于大多数细胞系，能够保证细胞在冻存过程中有较高的存活率。血清:DMSO=9:1适用范围：适用于需要长时间保存或者具有特别...