你知道什么是ELISA吗？

2023-09-04 酶联免疫吸附测定（enzymelinkedimmunosorbentassay，简写ELISA或ELASA）指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体特异性结合进行免疫反应的定性和定量检测方法。1971年Engvall和Perlmann发表了酶联免疫吸附剂测定（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）用于IgG定量测定的文章，使得1966年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法。这一方法的基本原理...

腺相关病毒（AAV）滴度快速检测试剂盒的介绍

2023-09-01 腺相关病毒（adeno-associatedvirus，AAV）,也称腺伴随病毒,属于微小病毒科依赖病毒属,是目前发现的一类结构最jian单的单链DNA缺陷型病毒，需要辅助病毒（通常为腺病毒）参与复制。那么想要真正准确可靠地检测腺相关病毒（AAV）滴度该怎么办呢？让我们一起来看看吧！AAV基因组为4.8kb的线状单链DNA；AAV免疫原性低，基因持续表达半年以上；AAV具有多种血清型，可以特异性靶向感染不同的组织或器官，是动物活体基因转导的shou选工具！腺相关病毒血清型众多...

免疫荧光（IF）实验常见问题有哪些？解决方案有什么？

2023-09-01 免疫荧光技术是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光素，制成荧光抗体，再用这种荧光抗体（或抗原）作为探针检测组织或细胞内的相应抗原（或抗体）。那么你知道在免疫荧光（IF）实验中会遇到那些问题以及这些问题的解决方法吗？让我们一起来看看吧！问题一：目标蛋白荧光很弱，导致组间差异不显著，导致假阴性结果解决方案：出现这种情况后，首先检查抗体是否正确，是否适用于预处理的组织。有些抗体只适用于冰冻切片，但如果应用于石蜡切片，则会出现弱标记或无标记现象。然后通过文献了解目的...

如何选择荧光蛋白？

2023-08-31 荧光标记在生物学众多的研究领域中有着十分广泛的应用，已经成为研究体内或细胞成像及生物细胞功能的重要工具。荧光标记方式一般有两种，一种是细胞表达的荧光蛋白，另外一种是化学合成的荧光分子，此外，萤光素酶也是细胞标记的常用方法。每一种荧光分子都有其独te的激发波长和发射波长。萤光素酶不同于荧光分子，其发光机制是利用酶与底物的反应，催化发出的化学发光，其发光并不需要激发光的参与，常用于体内成像及萤光素酶报告基因的定量实验。荧光蛋白如何选择呢？让我们一起来看看吧！一、激发波长/发射波长...

DNA提取试剂盒，应该如何选？

2023-08-30 实验室工作中，经常会需要用到纯化的DNA，这时我们通常需要使用一个商业的DNA提取试剂盒对目的DNA进行分离纯化。市面上有很多类型的提取试剂盒，当使用不太熟悉的样本类型时，选择合适的盒子是尤为关键的，应该如何选择呢？让我们一起来看看吧！一、试剂盒组分目前大多数DNA提取试剂盒遵循相同的基本步骤:裂解，柱纯化，洗涤杂质，柱洗脱。然而，不同的盒子在完成每个步骤的方式上有很大的不同。二、使用的样本类型不同的DNA来源有不同的试剂盒，从实验室培养的细胞，到临床样本，土壤样本，甚至指纹...

提取DNA方法的优缺点，你知道吗？

2023-08-30 目前比较常用的提取DNA的方法有：苯酚氯仿抽提法、离心柱法和磁珠法，提取DNA的这些方法有哪些优缺点呢？你都知道吗？让小编带你来看看吧！一、苯酚氯仿抽提法苯酚氯仿提取DNA是利用酚是蛋白质的变性剂，反复抽提，使蛋白质变性，SDS(十二烷基磺酸钠)将细胞膜裂解，在蛋白酶K、EDTA的存在下消化蛋白质或多肽或小肽分子，变性降解核蛋白，使DNA从核蛋白中游离出来。而DNA易溶于水，却不溶于有机溶剂。蛋白质分子表面带有亲水基团，也容易进行水合作用，并在表面形成一层水化层，使蛋白质分子...

抗体如何保存合适？

2023-08-28 抗体保存好，实验失败少。那抗体如何保存合适？让我们一起来看看吧！一、保存温度和条件很多抗体的最佳保存条件是分装成小包装冻存于-20°C或-80°C。分装能使冻融引起的损失减到最小，同时可避免多次在一个管内取样而由枪头引入的污染。分装冻存的抗体，融解一次后剩余抗体应保存于4°C。收到抗体后，应10,000xg离心20秒，使管口螺纹内的抗体溶液全部离心至管底，用低蛋白吸附性的微量离心管分装。分装量的多少取决于每次试验的使用量。分装量不能少于10μl；分装量越少，由于蒸发和吸附于管...

常用的转染方法有哪些不同？

2023-08-28 转染方法很多，常见的有：DEAE－葡聚糖法、磷酸钙法、阳离子脂质体法、阳离子聚合物、逆转录病毒(RNA）、病毒介导法、Biolistic颗粒传递法（基因枪粒子轰击法）、显微注射法、电穿孔法等。常用的转染方法有哪些不同？让我们一起来看看吧！一、DEAE－葡聚糖法原理：带正电的DEAE-葡聚糖与核酸带负电的磷酸骨架相互作用形成的复合物被细胞内吞。主要应用：瞬时转染特点：相对简便、重复比磷酸钙好,但对细胞有一定的毒副作用,转染时需除血清且一般只用于BSC-1,CV-1,COS细胞系...